CNBr活化琼脂糖凝胶4B，CNBr-Activated Sepharose 4B

CNBr活化琼脂糖凝胶4B是一种用于固定含伯胺配基的预活化填料，以下是其详细介绍：

基本信息

• 中文名称：溴化氰活化琼脂糖凝胶4B
• 英文名称：CNBr-Activated Sepharose 4B
• 外观：白色浆状物，放置可分层/白色粉末状固体
• 基架：4%琼脂糖
• 颗粒大小：45~165μm
• 偶联官能团：伯氨基
• 储存条件：2~8℃，100%丙酮

特点

• 反应条件温和：与蛋白等生物大分子的反应条件温和，可直接偶联生物大分子，不需偶联间隔臂。
• 配基不易脱落：配基与基架可形成多位点偶联，配基不易脱落。
• 化学稳定性高：在常用的水性溶液中保持稳定，可与非离子型去污剂、变性溶剂（例如8M尿素和6M盐酸胍）一同使用，在有机溶剂（如50%二甲基甲酰胺和50%二恶烷）中也保持稳定。
• 偶联效率高：溴化氰法偶联反应自发、快速且易于进行，可在水相或者有机相中偶联。

应用领域

• 亲和层析：用于将抗体或其他含-NH₂基团的高分子量蛋白偶联至琼脂糖凝胶介质，制作特定的亲和介质，可应用于蛋白质、多肽、核酸等的偶联和纯化。
• 固定化酶：可将酶等生物分子固定在琼脂糖凝胶上，用于酶催化反应等研究。

使用方法

• 偶联：将保存于丙酮中的介质放于砂芯漏斗中，用预冷的偶联溶液A洗涤，配基用偶联溶液B溶解，将洗好的介质与配基溶液等体积混合，室温混匀或4℃搅拌过夜，配基偶联完成后需要对凝胶进行封闭和清洗。
• 层析柱装填：偶联配基后的介质需要装填在层析柱中，装柱前最好将介质悬液平衡到室温，按照一定的方法进行清洗、装柱胶悬液准备、装柱等操作。
• 柱效测定和评价：通过柱效测定和评价可以确认层析柱装填质量，一般用理论塔板高度（HETP）和非对称因子（As）来评价。
• 介质的使用：包括样品处理、选择合适的结合缓冲液和流速、确定上样量、清洗和洗脱等步骤。

注意事项

• CNBr活化琼脂糖凝胶4B仅供科研使用，不能用于人体实验。
• 使用时需严格按照相关实验规程进行操作，避免交叉污染等问题。
• 配基浓度太高会对亲和层析产生不利影响，因此需要选择合适的配基浓度。
• 在偶联过程中，需要注意控制反应条件，如pH值、温度等，以确保偶联效果和生物分子的活性。