2017.07.13实验兔外周血EPCs分离培养

一、物品准备：

1、抗凝取血管

2、2%台盼蓝溶液，1克台盼蓝配5ml纯水。

3、HBSS缓冲液、1083

4、EBM培养基，加入生长因子+10%FBS。

5、细胞记数板、电脑

6、离心机设置缓慢减速

7、房间紫外灭菌

二、取血（动物房）

1、兔子耳中动脉取血10ml,抗凝管每管2ml。

三、分离单核细胞（5810R房间）

1、HBSS稀释血液（可用可不用）

2、15ml管每管添加3ml1083，再再表面缓慢加入3ml血液，400Xg(rcf)30min离心。

3、用枪头缓慢吸出单核细胞，勿贪多。

四、接种细胞（细胞房）

1、培养皿提前1-2h用FN包被，有木有特异性？

2、用PBS清洗细胞，2-3次，1000转5min。

3、种板，3ml吹打细胞，6孔板，每孔2ml。

4、台盼蓝染色观察细胞活力，未染色细胞>95%。

5、观察细胞：铺路石样细胞，程团块状。

图片发自App

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