凝血块DNA提取操作步骤

产品特点

◎独有裂解液配方，凝血块消解快速，可在30分钟内获得基因组DNA；

◎改性离子膜技术，提取DNA纯度高，无抑制剂，A260/A280为1.7-1.9；

◎DNA提取得率高，可在相当于200μl 全血的凝血块中提取2-5 ug基因组DNA。

产品介绍

BIOG DNA Clotted Blood Isolate Kit是独家研制的专门用于凝血块基因组DNA提取的试剂盒。本试剂盒采用百代独有的裂解液和消化液配方，可快速消解凝血块的纤维网络，释放有核细胞，因而提取的DNA比较充分。BIOG DNA Clotted Blood Isolate Kit采用了最新的离子膜技术，裂解液和洗脱液经过多次优化，提取得到的DNA产量更大，纯度更高，最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染，可以直接应用于PCR、荧光定量PCR和各种酶切试验等。

操作步骤 （请自行准备无水乙醇、异丙醇、灭菌1.5mL离心管）：

1. 取出洗涤液，按以下操作：

a) 洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液B：18mL加入42mL无水乙醇；36mL加入84mL无水乙醇，混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。

2. 取1.5ml离心管，放入5x5x5mm大小的凝血块，用枪头反复敲打挤压至1x1x1mm大小，加入200 μL裂解液、40μL消化液、涡旋强烈振荡30秒，65℃温育20分钟至血凝块完全消解。

3. 加入150μL异丙醇（总体积的25%），混合均匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。

4. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液；

5. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，静置1分钟，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。

6. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。

7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。

8. 按每份样本30μL 取洗脱液（如10份提取样本，即取300μL 洗脱液），放置于灭菌1.5mL离心管，65℃预热。

9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 离心2 分钟，离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 灭菌离心管内，在吸附柱中心加入30 μL 预热洗脱液，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项：

1. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼

睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。

2. 洗涤液在使用前应加入无水乙醇后充分混匀。