流式（肿瘤） 2019.05.24

1 取肿瘤

    器材：杀鼠板，手术器械，酒精喷壶；六孔板，6cm_dish 2个
    试剂：PBS
    1.1 在六孔板中倒入PBS待用。
    1.2 小鼠脱颈处死，检查小鼠标记（脚趾为1~10，手指为20~90），并在六孔板盖上做好标记。
        喷足量酒精，剪开皮肤，小心取下肿瘤，置于盛有PBS的六孔板中。
    1.3 用纸巾吸干肿瘤表面PBS，置于dish中，称重并记录。完成称重的肿瘤放回PBS中。
        注意：完成称重步骤后关闭电子天平，收回称重用的dish。
    1.4 整理清洗杀鼠板、鼠笼，丢弃dish，放回PBS。

2 消化

    器材：小剪刀、镊子，酒精喷壶；六孔板
    试剂：无血清培养基、消化酶
    2.1 取另一六孔板，在盖子上做好标记。
        将肿瘤从PBS中取出，放入该六孔板的相应格子中剪碎。
            注意：剪下一个肿瘤前，先用酒精将小剪刀和镊子擦拭干净。
        加入2ml无血清培养基，用枪头冲散搅匀。
    2.2 在每一格中加入7.5ul消化酶，并充分混匀。
        注意：酶在常温下易失活，用完应立即放回冰箱。
    2.3 37℃消化30min，计时。
    2.4 清洗手术器械，放入烘箱15min；丢弃盛有PBS的六孔板；
        放回酒精喷壶、无血清培养基；酒精擦拭台面。

3 研磨

    器材：蓝色滤网，2ml注射器，白色滤膜，国产15ml离心管，10cm_dish；剪刀，1ml枪，蓝枪头；冰盒
    试剂：有血清培养基（应置于冰上）
    3.1 将消化好的六孔板置于冰上。将离心管做好标记。
    3.2 将滤网置于六孔板中，将消化后的培养基和团块转移到滤网中。
            技巧：转移前先用剪刀减去蓝枪头尖，以便吸取组织团块
        用注射器的软塞部充分研磨团块。
            注意：此时滤网应浸在培养基中，以使细胞透过滤膜进入培养基。
    3.3 用2ml有血清培养基反复冲洗滤网，使细胞进入培养基中。
        在离心管口置一400目滤膜，将含肿瘤细胞的培养基过滤到离心管中。
            注意：盛有细胞的离心管应置于冰上。
    3.4 先用自来水冲洗滤网，再用枪头吸取PBS冲洗滤网，废液暂时置于10cm_dish中。
            注意：滤网不能放在冲洗过后的PBS中，防止滤网背面粘附组织块。
                 用PBS冲洗滤网时应从滤网的正面冲洗，以避免组织块粘附在滤网背面，污染下一组实验的细胞。
    3.5 处理该组下一个消化后的肿瘤组织。
    3.6 处理下一组消化后的肿瘤组织。
    3.7 实验完成后清理垃圾，收拾器材和试剂，整理桌面。

4 染色

    除所用抗体不同外，其余操作同骨髓细胞染色(https://www.jianshu.com/p/be645f0f54d8)。
    包括离心、重悬，染色、终止，离心、洗脱，离心、重悬。

5 流式分析

    用CD45抗体筛选白细胞群体进行分析。